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अक्सर पूछे जाने वाले सेल कल्चर प्रश्न

1. अगर मुझे जमे हुए कोशिकाओं की एक ट्यूब मिलती है, तो क्या मैं इसे सीधे भंडारण के लिए तरल नाइट्रोजन में डाल सकता हूं?

कई मामलों में, सूखी बर्फ (-80 डिग्री सेल्सियस) पर ले जाने वाली कोशिकाओं को वापस तरल नाइट्रोजन में डाला जा सकता है और फिर बाद में जल्दी से पिघलाया जा सकता है।हालांकि, इस तरह के उपचार के बाद सेल व्यवहार्यता कम हो सकती है।कुछ संवेदनशील सेल लाइनों के लिए, यह सेल रिकवरी को और अधिक कठिन बना सकता है।इस घटना को तापमान परिवर्तन के परिणामस्वरूप कोशिकाओं के भीतर बर्फ के क्रिस्टल की संरचना में बदलाव के कारण माना जाता है।इसलिए यह अनुशंसा की जाती है कि प्राप्ति के बाद जितनी जल्दी हो सके कोशिकाओं को पिघलाया और सुसंस्कृत किया जाना चाहिए।-80 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण समय कम करें।इस तापमान का उपयोग केवल परिवहन के लिए किया जाता है।

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2. वसूली के लिए तरल नाइट्रोजन से कोशिकाओं को निकालते समय कौन से सुरक्षा उपाय किए जाने चाहिए?

तरल नाइट्रोजन में सेल क्रायोट्यूब जो पूरी तरह से सील नहीं हैं और उनमें तरल नाइट्रोजन का रिसाव हो रहा है, अगर क्रायोट्यूब का तापमान विगलन के दौरान तेजी से बढ़ता है तो विस्फोट हो सकता है।इसलिए यह अनुशंसा की जाती है कि तरल नाइट्रोजन से कोशिकाओं को निकालते समय काले चश्मे और सुरक्षात्मक दस्ताने पहने जाएं।पुनर्जीवन के लिए, फ्रीजिंग ट्यूब को 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में लगातार हिलाया जाना चाहिए ताकि 1-2 मिनट के भीतर फ्रीजिंग समाधान पूरी तरह से पिघल जाए।बाद में, एक शराब के साथ ट्यूब के बाहर पोंछे, फिर इसे अल्ट्रा-क्लीन टेबल में ले जाएं और कोशिकाओं को 10 मिलीलीटर संस्कृति माध्यम के साथ एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में स्थानांतरित करें, 5-10 मिनट के लिए 1000 आरपीएम पर अपकेंद्रित्र, त्यागें सतह पर तैरनेवाला, संस्कृति माध्यम की उचित मात्रा में जोड़ें और संस्कृति कुप्पी को टीका लगाएं और 5% CO2 इनक्यूबेटर में इनक्यूबेट करें।

3. कोशिकाओं को तरल चरण के बजाय तरल नाइट्रोजन टैंक के वाष्प चरण में क्यों संग्रहीत किया जाना चाहिए?

तरल नाइट्रोजन के गैस चरण में संग्रहीत कोशिकाओं के पुनर्जीवित होने की अधिक संभावना होती है।जबकि तरल नाइट्रोजन के तरल चरण में, यदि लियोफिलिज़ेशन ट्यूबों को ठीक से सील नहीं किया जाता है या उनमें रिसाव होता है, तो कोशिकाओं और तरल नाइट्रोजन के बीच सीधा संपर्क विगलन के बाद कोशिकाओं की व्यवहार्यता से समझौता कर सकता है।

4. सस्पेंशन सेल के लिए, मैं कल्चर मीडियम को कैसे बदलूं?

संवर्धन निलंबन कोशिकाओं को केवल ताजा माध्यम (यदि अंतरिक्ष अनुमति देता है) जोड़कर या पुराने माध्यम से कोशिकाओं को केंद्रापसारक (5 मिनट के लिए 100 xg) द्वारा अलग करके और बाद में ताजा माध्यम में उपजी कोशिकाओं को फिर से निलंबित करके किया जा सकता है।हालांकि, अधिकांश निलंबन सेल लाइनों के लिए, केवल माध्यम जोड़ना एक बेहतर तरीका है।किसी भी तरह से, कोशिकाओं को उनके सबसे बड़े संतृप्ति घनत्व तक पहुंचने से पहले माध्यम को नवीनीकृत करने की आवश्यकता होती है।कोशिकाओं का संतृप्ति घनत्व 3 x 10 5 और 2 x 10 6 के बीच भिन्न होता है जो सेल लाइन और संस्कृति की स्थिति (आराम या हलचल, ऑक्सीजन स्तर, आदि) पर निर्भर करता है।कोशिकाओं को कम सेल एकाग्रता में पतला होना चाहिए ताकि कोशिकाओं को लॉगरिदमिक रूप से बढ़ने के लिए पर्याप्त पोषक तत्व वसूली की अनुमति मिल सके।यदि सेल घनत्व को कम किए बिना माध्यम को आसानी से बदल दिया जाता है, तो कोशिकाएं तेजी से माध्यम को समाप्त कर देंगी और मर जाएंगी।यदि कोशिकाओं को उनके सबसे छोटे घनत्व से नीचे पतला किया जाता है, तो वे एक अंतराल चरण में प्रवेश करेंगे और बहुत धीरे-धीरे बढ़ेंगे या मर जाएंगे।प्रत्येक निलंबन सेल लाइन में एक अलग संतृप्ति घनत्व और पासिंग अंतराल होता है, इसलिए दैनिक सेल गणना निलंबन सेल लाइनों की निगरानी करने का तरीका है*।

5. सेल कल्चर के लिए अनुशंसित CO2 स्तर क्या है?

हालांकि सेल कल्चर सिस्टम में CO2 का स्तर 0.03% से 40% (आमतौर पर वातावरण में लगभग 0.03% CO2) के बीच होता है, लेकिन हवा में कोई CO2 या 5% से 10% की CO2 सांद्रता नहीं होना बहुत आम है।गैस चरण में CO2 स्तर के साथ संतुलन के लिए माध्यम में सोडियम बाइकार्बोनेट की एकाग्रता को समायोजित करना महत्वपूर्ण है।कोशिकाएं CO2 का उत्पादन करती हैं और वृद्धि और अस्तित्व के लिए थोड़ी मात्रा में कार्बोनिक एसिड की आवश्यकता होती है।यदि कोई CO2 नहीं जोड़ा जाता है और कोशिकाएँ गुणा कर रही हैं, तो 4 mM (0.34 g/L) निर्जल सोडियम बाइकार्बोनेट का उपयोग किया जा सकता है।हालांकि, इस बिंदु पर संस्कृति कुप्पी का ढक्कन कड़ा होना चाहिए।यदि संस्कृति प्रणाली को 5% या 10% CO2 की आवश्यकता होती है, तो लगभग 7.6 के प्रारंभिक पीएच के साथ 23.5 मिमी (1.97 ग्राम/ली) या 47 मिमी (3.95 ग्राम/ली) सोडियम बाइकार्बोनेट क्रमशः 37 डिग्री सेल्सियस पर उपयोग करें।इन शर्तों के तहत, फ्लास्क को बिना ढके छोड़ दिया जाना चाहिए या गैस संतुलन बनाए रखने के लिए पेट्री डिश का उपयोग किया जाना चाहिए।

6. कुछ कोशिकाओं को सोडियम पाइरूवेट की आवश्यकता क्यों होती है?मुझे माध्यम में कितना सोडियम पाइरूवेट मिलाना चाहिए?

पाइरूवेट ग्लाइकोलाइटिक मार्ग* में एक कार्बनिक अम्ल मेटाबोलाइट है जो आसानी से कोशिका में प्रवेश करता है और छोड़ देता है।इसलिए, माध्यम में सोडियम पाइरूवेट के अलावा उपचय के लिए एक ऊर्जा स्रोत और कार्बन स्रोत दोनों प्रदान करता है, कुछ विशिष्ट कोशिकाओं को बनाए रखने में मदद करता है, सेल क्लोनिंग में मदद करता है या जब माध्यम में सीरम सांद्रता कम हो जाती है तो इसकी आवश्यकता होती है।सोडियम पाइरूवेट भी फ्लोरोसेंस-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी को कम करने में मदद करता है।सोडियम पाइरूवेट आमतौर पर 1 मिमी की अंतिम एकाग्रता में जोड़ा जाता है।व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सोडियम पाइरूवेट समाधान आमतौर पर 100 मिमी भंडारण समाधान (100X) होते हैं।

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पोस्ट करने का समय: जून-21-2022